用分光光度法測(cè)定土壤中的氨氮的含量

氨氮是指以游離氨和銨離子形式存在的氮。氨氮是土壤中一種重要的污染因子，對(duì)土壤中氨氮進(jìn)行監(jiān)測(cè)能夠掌握其污染狀況。本文參考《HJ634-2012 土壤 氨氮的測(cè)定 氯化鉀溶液提取-分光光度法》，應(yīng)用分光光度法測(cè)定土壤中氨氮含量。

實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備

1.1方法原理

氯化鉀溶液提取土壤中的氨氮，在堿性條件下，提取液中的氨離子在有次氯酸跟離子存在時(shí)與苯酚反應(yīng)生成藍(lán)色靛酚染料，在630nm波長(zhǎng)具有大吸收。在一定濃度范圍內(nèi)，氨氮濃度與吸光度值符合朗伯-比爾定律。

1.2儀器設(shè)備

1.3 試劑

除非另有說明，分析時(shí)均使用符合國家標(biāo)準(zhǔn)的分析純?cè)噭瑢?shí)驗(yàn)用水為電導(dǎo)率小于0.2ms/m（25℃時(shí)測(cè)定）的去離子水濃硫酸ρ（H2SO4）=1.84g/ml二水檸檬酸鈉、二氯異氰尿酸鈉、氯化鉀、氯化銨、苯酚

1.4試劑配制

1.4.1 氯化鉀溶液（1mol/L）：稱取74.55g氯化鉀，用適量水溶解，移入1000ml容量瓶中，用水定容、混勻。

1.4.2 氯化銨標(biāo)準(zhǔn)貯備液（200mg/L）：稱取0.764g氯化銨（105℃下烘干2h），用適量水溶解，加入0.30ml濃硫酸，冷卻后移入1000ml容量瓶中，用水定容，混勻。該溶液在避光、4℃下可保存一個(gè)月。

1.4.3 氯化銨標(biāo)準(zhǔn)使用液（10mg/L）：量取5.0ml氯化銨標(biāo)準(zhǔn)貯備液于100ml容量瓶中，用水定容、混勻。用時(shí)現(xiàn)配。

1.4.4 苯酚溶液：稱取70g苯酚溶于1000ml水中。該溶液貯存于棕色玻璃瓶中，在室溫條件下可保存一年。

1.4.5 二水硝普酸鈉溶液：稱取0.8g二水硝普酸鈉溶于1000ml水中。該溶液貯存于棕色玻璃瓶中，在室溫條件下可保存三個(gè)月。

1.4.6 緩沖溶液：稱取280g二水檸檬酸鈉及22.0g氫氧化鈉，溶于500ml水中，移入1000ml容量瓶中，用水定容、混勻。

1.4.7 硝普酸鈉-苯酚顯色劑：量取15ml二水硝普酸鈉溶液及15ml苯酚溶液和750ml水，混勻。該溶液用時(shí)現(xiàn)配。

1.4.8 二氯異氰尿酸鈉顯色劑：稱取5.0g二氯異氰尿酸鈉溶于1000ml緩沖溶液中，4℃下可保存一個(gè)月。

實(shí)驗(yàn)過程

2.1 標(biāo)樣測(cè)定

分別量取0、0.10、0.20、0.50、1.00、2.00、3.50ml氯化銨標(biāo)準(zhǔn)使用液于一組100ml具塞比色管中，加水至10.0ml，制備標(biāo)準(zhǔn)系列。氨氮含量分別為0、1.0、2.0、5.0、10.0、20.0、35.0ug。

向標(biāo)準(zhǔn)系列中加入40ml硝普酸鈉-苯酚顯色劑，充分混合，靜置15min。然后分別加入1.00ml二氯異氰尿酸鈉顯色劑，充分混合，在15℃-35℃條件下只是靜置5h。于630nm波長(zhǎng)處，以水為參比，測(cè)量吸光度。以扣除零濃度的校正吸光度為縱坐標(biāo)，氨氮含量（ug）為橫坐標(biāo)，繪制校準(zhǔn)曲線。

2.2 樣品測(cè)定

將采集后的土壤樣品去除雜物，手工或儀器混勻，過樣品篩。在進(jìn)行手工混合時(shí)應(yīng)戴橡膠手套。過篩后樣品分為兩份，一份用于測(cè)定干物質(zhì)含量，另一份用于測(cè)定待測(cè)組分含量。

稱取40.0g試樣，放入500ml聚丙烯瓶中，加入200ml氯化鉀溶液，在20±2℃的恒溫水浴振蕩器中震蕩提取1h。轉(zhuǎn)移約60ml提取液于100ml聚乙烯離心管中，在3000r/min的條件下離心分離10min。然后將約50ml上清液轉(zhuǎn)移至100ml比色管中，制得試料，待測(cè)。量取10.0ml試料至100ml具塞比色管中，按照標(biāo)準(zhǔn)曲線比色步驟測(cè)定吸光度。同時(shí)做空白試驗(yàn)。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線方程

根據(jù)標(biāo)樣測(cè)定方法測(cè)量各標(biāo)樣的吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線方程如下：

3.2 樣品測(cè)定結(jié)果

根據(jù)《HJ634-2012土壤氨氮的測(cè)定氯化鉀溶液提取-分光光度法》和《HJ613-2011土壤干物質(zhì)和水分的測(cè)定重量法》進(jìn)行計(jì)算，該土壤氨氮含量為15.9mg/Kg。

3.3 回收率測(cè)定

在樣品中分別加入0.1ppm和0.2ppm的標(biāo)準(zhǔn)溶液，進(jìn)行加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)測(cè)定結(jié)果。

3.4 精密度測(cè)定

對(duì)樣品重復(fù)測(cè)試11次，得到相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為0.377%。